Plasmide Double Nickase (h) PEPCK-M/PCK2: sc-400725-NIC

Le gène humain PCK2 code l’isoforme mitochondriale de la phosphoénolpyruvate carboxykinase (PEPCK-M), une enzyme clé de la néoglucogenèse et de l’anaplérose qui convertit l’oxaloacétate en phosphoénolpyruvate, reliant les intermédiaires du cycle de l’acide citrique (cycle de Krebs) aux voies biosynthétiques cytosoliques. En modulant les flux de carbone entre les compartiments mitochondrial et cytosolique, PCK2 influence le métabolisme du glucose et des lipides, l’équilibre rédox et l’utilisation des acides aminés en situation de stress nutritionnel. L’activité de PCK2 s’articule avec des voies impliquées dans l’adaptation métabolique, notamment la néoglucogenèse, la cataplérose, ainsi que les réseaux de sérine/glycine et de glycéronéogenèse. Une expression ou une fonction dérégulée de PCK2 a été associée à des états métaboliques altérés observés dans le métabolisme tumoral, la résistance à l’insuline et d’autres troubles caractérisés par des perturbations de l’homéostasie mitochondriale et glucidique.

PEPCK-M/PCK2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PCK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PCK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PCK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PCK2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.