Pellino 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402305-ACT

O gene humano **PELI2** codifica a **Pellino 2**, uma ligase de ubiquitina E3 que ajuda a acoplar a sinalização de receptores de reconhecimento de padrões às respostas inflamatórias e antivirais a jusante. A Pellino 2 participa da regulação dependente de ubiquitina de complexos de adaptadores e quinases nas vias do receptor do tipo Toll (TLR) e do receptor de interleucina-1 (IL-1R), moldando a ativação das vias de sinalização **NF-κB** e **MAPK** e influenciando a produção de citocinas. Ao modular a renovação (turnover) de proteínas e a amplitude do sinal, **PELI2** contribui para a homeostase da imunidade inata e para respostas ao estresse celular relevantes à desregulação da sinalização inflamatória. A regulação alterada da ubiquitinação e de vias da imunidade inata envolvendo a Pellino 2 tem sido estudada no contexto de mecanismos de doenças mediadas pelo sistema imune e de interações hospedeiro–patógeno.

Pellino 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PELI2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pellino 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PELI2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PELI2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pellino 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PELI2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pellino 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pellino 2 em células tumorais com expressão de PELI2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.