PDGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400586

Übersicht

PDGFB kodiert die Untereinheit B des thrombozytenabgeleiteten Wachstumsfaktors (platelet-derived growth factor, PDGF‑B), ein sezerniertes Mitogen, das aktive PDGF‑Dimere bildet und vorwiegend über PDGF‑Rezeptor-Tyrosinkinasen signalisiert, um die Rekrutierung von Perizyten, die Gefäßreifung und die Proliferation mesenchymaler Zellen zu regulieren. Die durch PDGF‑B ausgelöste Signalübertragung aktiviert die MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und PLCγ‑Signalwege und steuert dadurch Zytoskelett-Umbau, Chemotaxis und die Ablagerung extrazellulärer Matrix in stromalen und vaskulären Kompartimenten. Eine fehlregulierte PDGFB-Expression bzw. Aktivierung der PDGF‑Achse wird mit pathologischer Angiogenese, fibrotischem Umbau sowie PDGF‑abhängigen autokrinen oder parakrinen Wachstums-Schaltkreisen in unterschiedlichen Tumormikroumgebungen in Verbindung gebracht. Daher wird PDGFB breit in der Forschung zur Endothel‑Perizyten‑Kommunikation, zur Wundheilungsbiologie und zu stromalen Signalnetzwerken untersucht, die für Gewebeumbau und Krebsbiologie relevant sind.

Das PDGF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PDGFB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PDGFB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PDGFB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PDGF-B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PDGFB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PDGF-B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PDGFB-Exone abzielen, die für die PDGF-B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PDGFB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PDGF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PDGF-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PDGFB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PDGF-B HDR-Plasmid (h) und PDGF-B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PDGFB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PDGFB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.