PDE3B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401773

Descripción general

PDE3B codifica la fosfodiesterasa 3B, una hidrolasa de doble especificidad para cAMP/cGMP que configura microdominios de nucleótidos cíclicos y controla la señalización dependiente de PKA y PKG. En adipocitos y hepatocitos, PDE3B integra señales de insulina y catecolaminas para regular la lipólisis, los programas gluconeogénicos y el almacenamiento de energía mediante vías que incluyen PI3K–AKT y redes de fosforilación aguas abajo. En las células β pancreáticas, PDE3B modula el acoplamiento estímulo-secreción ajustando la dinámica del cAMP que influye en la exocitosis de gránulos de insulina. La actividad desregulada de PDE3B se ha asociado con fenotipos metabólicos relacionados con la sensibilidad a la insulina, la señalización vinculada a la obesidad y la homeostasis lipídica, lo que respalda su utilidad en estudios mecanísticos de biología endocrina y cardiometabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PDE3B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDE3B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDE3B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDE3B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PDE3B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDE3B para la investigación de la señalización de PDE3B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PDE3B críticos para la función de PDE3B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDE3B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PDE3B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PDE3B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDE3B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PDE3B (h) y el plásmido HDR PDE3B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDE3B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDE3B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.