Partículas Lentivirales de Activación (h) Pax-8: sc-401757-LAC

PAX8 codifica Pax-8, un factor de transcripción de tipo *paired box* necesario para la especificación de linaje y la diferenciación en las células foliculares tiroideas, el epitelio renal y los tejidos derivados de Müller. Pax-8 regula programas génicos que controlan la identidad epitelial, la organogénesis y la biosíntesis hormonal, incluidas redes transcripcionales que gobiernan genes específicos de la tiroides y vías de señalización del desarrollo. La expresión alterada de PAX8 o eventos de fusión se asocian con la tumorigénesis en contextos tiroideos y renales, mientras que su alteración en la línea germinal se ha vinculado con hipotiroidismo congénito y defectos del desarrollo urogenital. En modelos celulares, la actividad de PAX8 influye en estados de la cromatina y en circuitos transcripcionales que configuran la proliferación, la diferenciación y los resultados metabólicos.

Las partículas de activación lentiviral Pax-8 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PAX8 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Pax-8 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PAX8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Pax-8. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PAX8 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.