Pax CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402171-ACT

PAX2 kodiert den Paired-Box-Transkriptionsfaktor Pax2, einen sequenzspezifischen, DNA-bindenden Regulator, der für die embryonale Musterbildung und die Festlegung von Zelllinien essenziell ist – insbesondere in der Entwicklung von Niere, Urogenitaltrakt, Auge und zentralem Nervensystem. Pax2 koordiniert Genprogramme, die die epitheliale Differenzierung, das Zellüberleben und die Morphogenese steuern, über transkriptionelle Netzwerke, die mit entwicklungsbiologischen Signalwegen wie WNT, FGF und NOTCH verknüpft sind. Eine fehlregulierte PAX2-Expression oder Mutationen wurden mit angeborenen Fehlbildungen der Nieren und Harnwege sowie mit Entwicklungsstörungen des Auges in Verbindung gebracht; zudem wird eine veränderte Pax2-Aktivität auch im Kontext aberranter Proliferation und erhöhter Linienplastizität untersucht. Als Entwicklungsregulator wird PAX2 häufig als Marker und funktioneller Knotenpunkt in Modellen der Nephrogenese, in Organoid-Systemen und in Studien zur epithelialen Identität eingesetzt.

Pax-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PAX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pax-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PAX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PAX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pax-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PAX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pax-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pax-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PAX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.