Plasmide CRISPR d'Activation (h) PARD6B: sc-401699-ACT

Le gène humain **PARD6B** code Par-6 bêta, une protéine d’échafaudage de polarité à domaine PDZ qui assemble le complexe de polarité PAR avec PAR3 et la PKC atypique afin d’établir la polarité apico-basale et de coordonner la formation des jonctions serrées. Par ses interactions avec de petites GTPases telles que **CDC42** et **RAC1**, PARD6B contribue à réguler la dynamique du cytosquelette, la division cellulaire orientée et la morphogenèse épithéliale, avec des effets en aval sur la migration et l’architecture tissulaire. Des altérations de la signalisation de polarité impliquant PARD6B ont été associées à une désorganisation épithéliale et à des phénotypes invasifs dans des contextes pertinents pour le cancer, et cette protéine est également étudiée dans des processus développementaux et la fonction barrière. En tant que plaque tournante de signalisation au niveau des jonctions cellule–cellule, PARD6B constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer des programmes transcriptionnels et phénotypiques dépendants de la polarité.

PARD6B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PARD6B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PARD6B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PARD6B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PARD6B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PARD6B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PARD6B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PARD6B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PARD6B dans les cellules tumorales présentant une expression de PARD6B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.