Paraplegin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406299

概要

SPG7は、ミトコンドリア内膜に存在するm-AAAプロテアーゼ複合体のATP依存性メタロプロテアーゼであるパラプレジンをコードしており、タンパク質の品質管理、プロテアーゼによるプロセシング、ならびに膜タンパク質やマトリックス関連基質のうち誤って折りたたまれたものの分解・ターンオーバーを担います。パラプレジンは、内膜タンパク質組成を協調的に監視することで、ミトコンドリアのプロテオスタシス、呼吸鎖の維持、そして酸化ストレスやプロテオトキシックストレスに対する恒常性維持応答に寄与します。SPG7の機能障害はミトコンドリア機能を乱し、遺伝性痙性対麻痺を含む神経変性表現型と関連することから、軸索の脆弱性やエネルギー依存的な神経細胞維持機構を研究する上で有用な標的となります。SPG7に焦点を当てたモデルは、ミトコンドリアダイナミクス、アンフォールドド・プロテイン・レスポンス、ストレス適応シグナル伝達に関与する経路の理解にも役立ちます。

Paraplegin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPG7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPG7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPG7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Parapleginタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Parapleginシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPG7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Parapleginの機能に不可欠なSPG7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPG7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Paraplegin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびParaplegin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPG7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Paraplegin HDRプラスミド（h）および Paraplegin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPG7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPG7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。