PAR-3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-417018-NIC

F2RL2 は、プロテアーゼ活性化受容体3（PAR-3）をコードしており、PAR-3 はトロンビンに応答する G タンパク質共役受容体（GPCR）として、制御されたプロテオリティックな活性化を介して血小板シグナル伝達および血管細胞応答を調節します。PAR-3 は、カルシウム動員やキナーゼカスケード（凝固により駆動される細胞活性化と交差する経路）などを含む下流の GPCR シグナル伝達ネットワークを形成することで、止血および炎症経路に影響を与えます。ヒトでは、PAR ファミリーのシグナル伝達の変化が、血栓形成の異常、血管炎症、ならびに腫瘍―間質相互作用の破綻と関連づけられており、F2RL2 はプロテアーゼシグナルの機序研究において重要な標的となります。PAR-3 の機能を詳細に解析することは、疾患関連の微小環境におけるプロテアーゼ、GPCR、細胞外マトリックス由来シグナルのクロストークを検討するうえで有用です。

PAR-3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における F2RL2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、F2RL2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、F2RL2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、F2RL2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。