PAL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408281-ACT

SHCBP1は、SHC結合・紡錘体関連タンパク質1（SHC binding and spindle associated 1 protein）をコードしており、有糸分裂の進行や細胞質分裂に関与する、微小管および紡錘体関連因子です。その機能は中心体のダイナミクスや細胞周期制御と関連づけられています。SHCBP1の活性は、SHCアダプター下流の増殖性シグナル伝達と結び付けて報告されており、増殖因子シグナルと細胞骨格リモデリングを協調させる経路とも交差します。SHCBP1の発現異常は複数の腫瘍タイプで報告されており、増殖の変化、染色体不安定性、浸潤性表現型との関連でしばしば研究されています。ヒト細胞モデルでは、SHCBP1は有糸分裂制御と腫瘍性（オンコジェニック）シグナルおよびストレス応答を結び付ける機構を探るうえで、有用な結節点（ノード）となります。

PAL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SHCBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PAL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SHCBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSHCBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PALの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSHCBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPAL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSHCBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPAL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。