Plásmido CRISPR de Activación (m) PADI4: sc-422177-ACT

El gen murino **Padi4** codifica la peptidil arginina deiminasa 4 (PADI4), una enzima dependiente de Ca2+ que citrulina residuos de arginina en proteínas para modular la carga proteica, la organización de la cromatina y los programas transcripcionales. PADI4 está enriquecida en linajes mieloides y se asocia con la citrulinación de histonas durante la formación de trampas extracelulares de neutrófilos (NET), influyendo en la señalización de la inmunidad innata y en las respuestas inflamatorias. Mediante la regulación de estados epigenéticos y la modificación postraduccional de sustratos nucleares y del citoesqueleto, PADI4 afecta vías que controlan la diferenciación celular y las respuestas al estrés. La citrulinación desregulada se asocia con autoinmunidad y patología inflamatoria, lo que convierte a **Padi4** en un blanco útil para estudiar mecanismos de enfermedad mediada por el sistema inmune y redes de modificación proteica.

PADI4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Padi4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PADI4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Padi4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Padi4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PADI4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Padi4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PADI4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PADI4 en células tumorales con expresión de Padi4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.