PABP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422100

概要

マウスPabpc1はポリ(A)結合タンパク質（PABP）をコードしており、ポリ(A)尾部に結合して翻訳開始、mRNAの安定化、デアデニル化依存的な分解を協調的に制御する、細胞質mRNA運命の中心的な調節因子である。PABPはeIF4Gや他のRNA結合タンパク質との相互作用を介して、ポリ(A)尾部長とリボソーム動員を結び付け、増殖・分化・ストレス応答の過程で効率的なタンパク質合成を支える。さらにPABPは、細胞周期の進行、アポトーシス、自然免疫における抗ウイルス応答に関与する転写後制御プログラムにも寄与するため、Pabpc1は遺伝子発現の破綻を扱う研究において重要な結節点となる。PABP依存的なmRNA調節ネットワークの攪乱は、がん化に伴う翻訳プログラムや、RNA代謝の変化に起因する神経発達性／神経変性表現型の文脈でしばしば検討される。

PABP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPabpc1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pabpc1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pabpc1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PABPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PABPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pabpc1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PABPの機能に不可欠なPabpc1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pabpc1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PABP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPABP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pabpc1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PABP HDRプラスミド（m）および PABP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPabpc1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPabpc1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。