Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
P5CRL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406033
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- P5CRL El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico P5CRL, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: P5CRL Anticuerpo (E-63): sc-100487
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
P5CRL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406033 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PYCRL codifica una proteína similar a la pirrolina-5-carboxilato reductasa (P5CRL), miembro de la familia de reductasas dependientes de NAD(P)H e implicada en el metabolismo redox de la prolina y aminoácidos relacionados. La biosíntesis y el recambio de prolina influyen en el equilibrio redox celular, la homeostasis de NADP(H) y la adaptación metabólica asociada a la mitocondria, lo que vincula a PYCRL con procesos más amplios como las respuestas al estrés oxidativo y el control del flujo biosintético. La alteración de enzimas de la vía de la prolina puede afectar la proliferación, la remodelación de la matriz extracelular a través de las demandas asociadas al colágeno y la tolerancia al estrés por falta de nutrientes. En consecuencia, PYCRL es de interés para estudiar la reprogramación metabólica en contextos relevantes para la enfermedad en los que se alteran el redox y el metabolismo de aminoácidos, incluida la biología del cáncer y las disfunciones metabólicas hereditarias.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO P5CRL (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PYCRL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PYCRL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PYCRL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P5CRL.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PYCRL para la investigación de la señalización de P5CRL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PYCRL críticos para la función de P5CRL
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PYCRL para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido P5CRL CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido P5CRL CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PYCRL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P5CRL (h) y el plásmido HDR P5CRL (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PYCRL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PYCRL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.