p41-ARCb CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419207

概要

Arpc1bはp41-ARCbをコードしており、これは動的な細胞骨格リモデリングに必要な分岐状アクチンネットワークの形成（核化）を担うArp2/3複合体の制御サブユニットです。マウス細胞では、p41-ARCbはRhoファミリーGTPアーゼや核化促進因子の下流でアクチン重合を協調的に制御することで、ラメリポディア形成、細胞遊走、エンドサイトーシス、免疫細胞のエフェクター機能などの過程を支えます。Arp2/3依存的なアクチン組み立ては、接着、小胞輸送、免疫シナプスの構築を制御するシグナル伝達経路と相互に関わります。ARPC1B/Arp2/3活性の制御異常は造血系および免疫細胞の挙動異常と関連しており、in vivo／in vitroで免疫不全様表現型や炎症メカニズムを研究するうえで重要です。

p41-ARCb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるArpc1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Arpc1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Arpc1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p41-ARCbタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p41-ARCbシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Arpc1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p41-ARCbの機能に不可欠なArpc1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Arpc1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p41-ARCb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびp41-ARCb CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Arpc1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p41-ARCb HDRプラスミド（m）および p41-ARCb HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはArpc1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のArpc1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。