P2X7 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400780-NIC

ヒトP2RX7は、ATPによって開口するカチオンチャネルであるプリン作動性受容体P2X7をコードしており、細胞外の危険シグナルをイオンフラックス、膜透過性亢進、ならびに下流の炎症応答へと結び付けます。P2X7の活性化はCa²⁺/Na⁺の流入とK⁺の流出を促進し、NLRP3インフラマソームの活性化、IL-1βの成熟、パイロトーシスを支える一方で、ROS産生、オートファジー、代謝適応にも影響を及ぼします。これらの過程を通じてP2X7は、骨髄系およびリンパ系コンパートメントにおける免疫細胞の活性化、サイトカイン放出、細胞死経路とプリン作動性シグナル伝達を連関させます。P2RX7の活性およびシグナル伝達の破綻は、慢性炎症、神経炎症プロセス、腫瘍—免疫微小環境の調節と関連付けられており、自然免疫やストレスシグナルの機序研究における有用な標的となっています。

P2X7 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における P2RX7 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、P2RX7内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、P2RX7の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、P2RX7が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。