Plasmide Double Nickase (m) P2X4: sc-422092-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) P2X4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide P2X4 Double Nickase (m) et le plasmide P2X4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant P2rx4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: P2X4 Antibody (D-3): sc-518167
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) P2X4 | sc-422092-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) P2X4 | sc-422092-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **P2rx4** code le canal cationique **P2X4** activé par l’ATP, un canal ionique ligand‑dépendant qui médie une entrée rapide de **Na⁺** et de **Ca²⁺** en réponse à l’ATP extracellulaire. P2X4 contribue à la signalisation purinergique qui module l’excitabilité membranaire, les voies intracellulaires dépendantes du calcium, ainsi que les réponses en aval impliquant des kinases et la régulation transcriptionnelle dans des types cellulaires immunitaires et neuronaux. Il est associé à l’activation microgliale et à la signalisation neuro‑inflammatoire, et a été étudié dans des contextes incluant les mécanismes de la douleur neuropathique, la modulation synaptique, la régulation vasculaire et les réponses inflammatoires. Ces caractéristiques biologiques font de **P2rx4** une cible utile pour étudier la communication cellulaire induite par l’ATP et les réseaux de signalisation dépendants du calcium dans des modèles murins.
P2X4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus P2rx4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de P2rx4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de P2rx4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de P2rx4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.