Plasmide CRISPR/Cas9 KO p22-phox (h): sc-400325

Présentation

CYBA code pour p22-phox, une sous-unité membranaire essentielle du complexe NADPH oxydase (NOX2) des phagocytes, qui stabilise gp91-phox/NOX2 et favorise l’assemblage de l’oxydase active au niveau des membranes phagosomales et plasmatiques. En permettant le transfert d’électrons vers l’oxygène moléculaire, p22-phox est indispensable à une production régulée d’espèces réactives de l’oxygène (ERO/ROS), contribuant à la défense antimicrobienne et à la signalisation dépendante du statut rédox dans les cellules de l’immunité innée. Les ROS dépendantes de CYBA influencent des voies liées à la phagocytose, à la production de médiateurs inflammatoires et à la dynamique de l’explosion oxydative. La perturbation génétique ou l’expression altérée de CYBA est associée à une diminution de l’activité NOX et est étudiée dans le contexte de phénotypes de type maladie granulomateuse chronique, de dérégulation inflammatoire et de réponses cellulaires liées au stress oxydatif.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO p22-phox (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYBA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYBA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYBA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine p22-phox.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYBA pour l'étude de la signalisation de p22-phox, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYBA essentiels à la fonction de p22-phox
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYBA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le p22-phox plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le p22-phox plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYBA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le p22-phox plasmide HDR (h) et le p22-phox (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYBA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYBA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.