p19 INK4D/CDKN2D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401761

Descripción general

CDKN2D codifica p19 INK4D, un miembro de la familia INK4 de inhibidores de quinasas dependientes de ciclinas que restringe selectivamente la actividad de CDK4/6 para mantener RB1 en un estado hipofosforilado y limitar la progresión del ciclo celular de G1 a S. Al modular la señalización ciclina D–CDK, p19 INK4D contribuye al control de puntos de control, a la temporización de la proliferación y a programas de diferenciación celular en múltiples contextos tisulares. La alteración de esta vía se asocia con frecuencia con una entrada desregulada al ciclo celular y con defectos en el mantenimiento del genoma, relevantes para la biología del cáncer y otros trastornos proliferativos. Por ello, CDKN2D se utiliza ampliamente como un nodo para analizar la regulación del eje CDK4/6–RB, estados similares a la senescencia y el control del crecimiento sensible al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO p19 INK4D/CDKN2D (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDKN2D en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDKN2D junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDKN2D tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína p19 INK4D/CDKN2D.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDKN2D para la investigación de la señalización de p19 INK4D/CDKN2D, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CDKN2D críticos para la función de p19 INK4D/CDKN2D
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDKN2D para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido p19 INK4D/CDKN2D CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDKN2D. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR p19 INK4D/CDKN2D (h) y el plásmido HDR p19 INK4D/CDKN2D (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDKN2D para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDKN2D definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.