p130 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400721-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p130 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- p130 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal p130 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal p130 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di RBL2. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: p130 Antibody (A-10): sc-374521
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p130 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-400721-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il gene umano RBL2 codifica la proteina retinoblastoma-like p130 (RB2), una pocket protein che interagisce con i fattori di trascrizione E2F per imporre l’arresto in G0/G1 e limitare l’espressione dei geni della fase S. p130 è un effettore chiave del complesso DREAM, coordinando i programmi di quiescenza del ciclo cellulare e collegando la segnalazione delle chinasi ciclina-dipendenti alla repressione trascrizionale. Attraverso la regolazione di reti geniche legate a proliferazione, differenziamento e senescenza, l’alterazione dell’attività di RBL2/p130 è spesso oggetto di studio in contesti di disregolazione del ciclo cellulare e stabilità del genoma. Un controllo sbilanciato p130–E2F è rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione oncogenica e sulle perturbazioni delle vie oncosoppressori nelle cellule umane.
p130 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RBL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
p130 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RBL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RBL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di p130. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RBL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da p130 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via p130 nelle cellule tumorali con espressione di RBL2 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.