osteocalcin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400299-NIC

BGLAPは、ビタミンK依存性のγ-カルボキシル化を受ける細胞外マトリックスタンパク質であるオステオカルシンをコードしており、オステオカルシンは骨芽細胞から分泌され、骨の石灰化過程においてハイドロキシアパタイトに取り込まれます。オステオカルシンは、RUNX2駆動性転写、コラーゲンマトリックスの沈着、ならびにカルシウム／リン酸の恒常性と連動して調整される骨芽細胞の分化プログラムおよび骨リモデリング過程に関与します。BGLAPの発現変化やオステオカルシンの成熟異常は、骨形成状態の指標（リードアウト）としてしばしば用いられ、骨粗鬆症、骨軟化症、腫瘍関連骨溶解などの病態における骨代謝回転の異常と関連づけられています。マトリックス関連マーカーとしてのオステオカルシンは、骨生物学モデルにおける骨格発生、石灰化ダイナミクス、骨微小環境シグナル伝達の機序解明研究を支えます。

osteocalcin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BGLAP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BGLAP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BGLAPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BGLAPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。