osteocalcin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400299

Übersicht

BGLAP kodiert Osteocalcin, ein sezerniertes, vitamin‑K‑abhängiges, nicht kollagenes Protein, das von Osteoblasten produziert und als wichtiger Marker der osteogenen Differenzierung in die extrazelluläre Knochenmatrix eingelagert wird. Osteocalcin bindet an Hydroxylapatit und trägt zur Mineralreifung sowie zur Kalziumhomöostase bei, wodurch knochenbildende Programme mit der Organisation der extrazellulären Matrix verknüpft werden. Seine Expression ist mit osteoblastären Regulationsnetzwerken koordiniert, einschließlich der durch RUNX2 gesteuerten Differenzierung und von Signalwegen, die den Knochenumbau mit der Kommunikation zwischen Osteoklasten und Osteoblasten koppeln. Eine veränderte Regulation von BGLAP/Osteocalcin wird häufig im Zusammenhang mit Phänotypen des Knochenumsatzes, Störungen der Skelettmineralisierung und Interaktionen zwischen Tumoren und der Knochenmikroumgebung untersucht.

Das osteocalcin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BGLAP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BGLAP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BGLAP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die osteocalcin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BGLAP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der osteocalcin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BGLAP-Exone abzielen, die für die osteocalcin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BGLAP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom osteocalcin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom osteocalcin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BGLAP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das osteocalcin HDR-Plasmid (h) und osteocalcin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BGLAP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BGLAP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.