ORMDL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403585-ACT

ORMDL2 (orosomucoide‑like 2) é uma proteína de membrana do retículo endoplasmático que participa da homeostase dos esfingolipídios ao modular a atividade da serina palmitoiltransferase e equilibrar a síntese de ceramida e esfingomielina. Por meio desse papel, a ORMDL2 influencia a composição da membrana do RE, o manejo de cálcio e a sinalização de estresse do RE, conectando o metabolismo lipídico à proteostase e a respostas inflamatórias. Alterações na regulação da família ORMDL têm sido associadas à inflamação das vias aéreas, a características relacionadas à asma e a fenótipos imunometabólicos mais amplos, tornando a ORMDL2 um alvo útil para estudar a sinalização dirigida por lipídios em células humanas. Sua posição na interseção entre a biossíntese de esfingolipídios e vias de resposta ao estresse sustenta pesquisas mecanísticas sobre como o fluxo lipídico do RE molda funções da imunidade inata e de barreira.

ORMDL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ORMDL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ORMDL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ORMDL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ORMDL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ORMDL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ORMDL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ORMDL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ORMDL2 em células tumorais com expressão de ORMDL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.