Oma1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402953

Descripción general

OMA1 codifica una metaloproteasa activada por estrés, incrustada en la membrana interna mitocondrial, que contribuye al control de calidad mitocondrial al procesar proteolíticamente sustratos como OPA1 para remodelar la arquitectura de las crestas y regular la dinámica de fusión–fisión mitocondrial. La actividad de Oma1 se induce por la despolarización mitocondrial y el estrés proteotóxico, integrando señales que influyen en la eficiencia de la fosforilación oxidativa, el manejo de especies reactivas de oxígeno y la vigilancia asociada a la mitofagia. Debido a su impacto en la morfología del orgánulo y la bioenergética, OMA1 se estudia en vías que regulan la susceptibilidad a la apoptosis y la adaptación metabólica. La desregulación del eje OMA1–OPA1 se ha asociado con fenotipos de disfunción mitocondrial relevantes para la neurodegeneración, el estrés cardiometabólico y otros trastornos en los que se implican alteraciones de la dinámica mitocondrial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Oma1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen OMA1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del OMA1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de OMA1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Oma1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en OMA1 para la investigación de la señalización de Oma1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de OMA1 críticos para la función de Oma1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de OMA1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Oma1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Oma1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus OMA1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Oma1 (h) y el plásmido HDR Oma1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología OMA1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana OMA1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.