OLIG2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424530-ACT

Olig2 kodiert OLIG2, einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor, der die Spezifikation neuraler Zelllinien im sich entwickelnden und im adulten zentralen Nervensystem der Maus steuert. OLIG2 ist in proneurale und gliale Regulationsnetzwerke eingebunden und kontrolliert die Proliferation, Migration und Schicksalsentscheidungen von Vorläuferzellen, mit prominenten Rollen bei der Differenzierung von Motoneuronen und Oligodendrozyten sowie bei myelinassoziierten Genprogrammen. Seine Aktivität überschneidet sich mit entwicklungsbiologischen Signalwegen, die neurale Musterbildung und den Chromatinzustand prägen, und beeinflusst dadurch Transkriptionsprogramme, die die regionale Identität festlegen. Eine fehlregulierte OLIG2-Expression und entsprechende Linienprogramme werden häufig im Kontext neuroentwicklungsbedingter Störungen, demyelinisierender Pathologien und der Gliombiologie untersucht – als Modelle für aberrantes Vorläuferzellverhalten und die Kontrolle glialer Zellschicksale.

OLIG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Olig2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OLIG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Olig2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Olig2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OLIG2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Olig2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OLIG2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OLIG2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Olig2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.