OLIG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424530-ACT

Olig2 codifica a OLIG2, um fator de transcrição do tipo hélice-alça-hélice básica (bHLH) que coordena a especificação de linhagens neurais no sistema nervoso central de camundongos em desenvolvimento e adultos. A OLIG2 se integra a redes regulatórias proneurais e gliais para controlar a proliferação, migração e decisões de destino de progenitores, com papéis de destaque na diferenciação de neurônios motores e oligodendrócitos e em programas gênicos associados à mielina. Sua atividade interage com vias de sinalização do desenvolvimento que moldam o padrão neural e o estado da cromatina, influenciando programas transcricionais que definem a identidade regional. A expressão desregulada de OLIG2 e seus programas de linhagem são frequentemente estudados em transtornos do neurodesenvolvimento, patologias desmielinizantes e na biologia de gliomas como modelos de comportamento aberrante de progenitores e controle do destino glial.

OLIG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Olig2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OLIG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Olig2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Olig2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OLIG2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Olig2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OLIG2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OLIG2 em células tumorais com expressão de Olig2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.