OLIG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400670-ACT

OLIG2 codifica um fator de transcrição do tipo basic helix-loop-helix (bHLH) que coordena a especificação de linhagens neurais, com papéis proeminentes no padrão do tubo neural ventral e no comprometimento de programas de precursores de oligodendrócitos e de neurônios motores. Por meio de redes transcricionais específicas de cada estágio, o OLIG2 interage com vias de sinalização do desenvolvimento, como SHH e Notch, para regular a proliferação de progenitores, o momento da diferenciação e as decisões de destino glial. A expressão desregulada de OLIG2 é frequentemente estudada no contexto de anormalidades do neurodesenvolvimento e da biologia de tumores cerebrais, onde tem sido associada a alterações no controle do estado celular e na capacidade proliferativa. Como regulador definidor de linhagem, o OLIG2 funciona como um nó-chave para dissecar circuitos de regulação gênica que governam o comportamento de células-tronco/progenitoras neurais e a maturação oligodendroglial.

OLIG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OLIG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OLIG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OLIG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OLIG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OLIG2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OLIG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OLIG2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OLIG2 em células tumorais com expressão de OLIG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.