Olfr45 Plasmide Double Nickase (m2): sc-422035-NIC-2
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Olfr45 Plasmide Double Nickase (m2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Olfr45 Double Nickase Plasmid (m2) e il Olfr45 Double Nickase Plasmid (m22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Olfr45. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Olfr45 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Olfr45 codifica un recettore olfattivo appartenente alla superfamiglia dei recettori accoppiati a proteine G (GPCR) che partecipa al riconoscimento degli odoranti e alla trasduzione del segnale nell’epitelio olfattivo sensoriale. Dopo il legame con il ligando, ci si aspetta che OLFR45 si accoppi a proteine G eterotrimeriche, modulando l’attività dell’adenilato ciclasi, la produzione di cAMP e la successiva attivazione di canali ionici, inducendo la depolarizzazione neuronale e l’ingresso di segnali nei circuiti olfattivi. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione dei recettori olfattivi sono rilevanti per studi sulla disfunzione sensoriale e su meccanismi più ampi di regolazione dei GPCR, inclusi il traffico recettoriale, la desensibilizzazione e il controllo trascrizionale durante la differenziazione neuronale. L’editing genetico di Olfr45 supporta esperimenti di genomica funzionale quali la mappatura della specificità odorante–recettore, l’analisi dei nodi di segnalazione dei GPCR nei neuroni sensoriali e la generazione di modelli murini per indagare fenotipi legati all’olfatto e l’omeostasi del neuroepitelio.
Olfr45 Il plasmide Double Nickase (m2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Olfr45 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Olfr45. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Olfr45. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Olfr45 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.