OLFM2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-434096-ACT

マウスのOlfm2は、オルファクトメディン2（OLFM2）をコードする遺伝子で、分泌性／細胞外マトリックス（ECM）関連の糖タンパク質として、組織構築や神経回路の接続性を形作る細胞―細胞間および細胞―マトリックス間相互作用の調節に関与するとされています。OLFM2は、細胞接着・遊走・分化に影響するECMリモデリングやシグナル伝達過程と関連づけられており、とくに神経発生およびシナプス生物学との関連が注目されています。発現解析および機能解析からは、OLFM2が神経突起の伸長や回路成熟を制御する経路に位置づけられており、細胞外からのシグナルの変化が興奮性や可塑性に影響し得ることが示唆されています。OLFM2活性の破綻は、神経系の表現型や、細胞外微小環境の変化を伴うより広範な疾患メカニズムの文脈で検討されており、機能ゲノミクスにおける機構解明の標的としての有用性を裏づけています。

OLFM2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Olfm2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OLFM2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Olfm2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOlfm2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OLFM2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOlfm2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOLFM2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOlfm2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOLFM2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。