Plasmide CRISPR/Cas9 KO OGFR (h): sc-407303

Présentation

Le récepteur du facteur de croissance opioïde (OGFR) est un récepteur opioïde non classique, exprimé de façon ubiquitaire, qui se lie à la [Met5]-enképhaline (facteur de croissance opioïde) afin de réguler la prolifération cellulaire et l’homéostasie tissulaire. La signalisation d’OGFR est surtout caractérisée via l’axe OGF–OGFR, qui module la progression du cycle cellulaire en influençant les voies des inhibiteurs des kinases dépendantes des cyclines et en limitant la synthèse d’ADN dans divers types cellulaires. Ce récepteur a été impliqué dans le renouvellement épithélial, le comportement des cellules immunitaires et stromales, ainsi que le contrôle de la croissance en réponse au stress, reliant la biologie d’OGFR à des contextes tels que la prolifération des cellules cancéreuses, la réparation des plaies et les pathologies inflammatoires. Par conséquent, la perturbation de l’expression d’OGFR est couramment utilisée pour disséquer les réseaux endogènes de signalisation inhibitrice de la croissance et leurs interactions avec les voies mitogènes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OGFR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène OGFR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du OGFR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert OGFR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OGFR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en OGFR pour l'étude de la signalisation de OGFR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de OGFR essentiels à la fonction de OGFR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de OGFR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OGFR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le OGFR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus OGFR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OGFR plasmide HDR (h) et le OGFR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie OGFR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles OGFR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.