OC-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432551

Übersicht

Onecut2 (OC-2) ist ein muriner Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung die Spezifizierung von Zellschicksalen und die Gewebemusterbildung koordiniert, mit ausgeprägten Funktionen in der Neurogenese und der Organdifferenzierung. Durch die Bindung an regulatorische DNA-Elemente moduliert OC-2 Transkriptionsprogramme, die mit abstammungsbestimmenden Netzwerken zusammenwirken, welche Proliferation, Differenzierung und regionale Identität steuern. Die Aktivität der Onecut-Familie trägt in zahlreichen epithelialen und neuronalen Kontexten zur Aufrechterhaltung der zellulären Identität und zur Reifung bei. Eine fehlregulierte ONECUT2-Expression wurde bei mehreren Tumorarten mit veränderten Differenzierungszuständen und onkogenen transkriptionellen Schaltkreisen in Verbindung gebracht, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt für Studien der Entwicklungs- und Krebsbiologie unterstreicht.

Das OC-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Onecut2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Onecut2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Onecut2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OC-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Onecut2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OC-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Onecut2-Exone abzielen, die für die OC-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Onecut2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OC-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom OC-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Onecut2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OC-2 HDR-Plasmid (m) und OC-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Onecut2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Onecut2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.