OAS2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404302-ACT

Humanes OAS2 (2′-5′-Oligoadenylat-Synthetase 2) ist ein durch Interferon induziertes Enzym, das virale doppelsträngige RNA erkennt und die Synthese von 2′-5′-verknüpften Oligoadenylaten katalysiert, welche RNase L aktivieren und so den Abbau viraler und zellulärer RNA fördern. Diese OAS2–RNase-L-Achse ist ein zentraler Bestandteil der angeborenen antiviralen Abwehr und prägt nachgeschaltete Entzündungs- und Stressantwort-Programme, wobei sie mit der Typ-I-Interferon-Signalgebung und Signalwegen von Mustererkennungsrezeptoren (PRRs) verknüpft ist. Veränderte OAS2-Aktivität und Expressionssignaturen wurden mit fehlregulierten Interferonantworten in Verbindung gebracht, die an viraler Anfälligkeit, chronischer Entzündung und autoimmunen Phänotypen beteiligt sind. Daher wird OAS2 häufig in Studien zu Wirt–Pathogen-Interaktionen, zytokingetriebenen transkriptionellen Netzwerken und RNA-Abbau-abhängiger Regulation der Immun-Signalgebung untersucht.

OAS2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen OAS2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OAS2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des OAS2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der OAS2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OAS2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native OAS2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OAS2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OAS2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem OAS2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.