OAS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402414-ACT

ヒトOAS1（2′-5′-オリゴアデニル酸合成酵素1）はインターフェロン刺激によって誘導される酵素で、ウイルス由来の二本鎖RNAを検知し、2′-5′結合のオリゴアデニル酸の合成を触媒します。これらのセカンドメッセンジャーはRNase Lを活性化し、ウイルスRNAおよび宿主細胞RNAの分解を促進するとともに、I型インターフェロン経路へのフィードバックを含む自然免疫シグナル伝達の形成に関与します。OAS1活性は、抗ウイルス制限、炎症の程度、ストレス応答に影響を与え、遺伝的多型や発現量の違いは、ウイルス感染状況における感受性や転帰の差、ならびにインターフェロン駆動性の免疫表現型の違いと関連づけられてきました。RNA感知免疫における中枢的なハブとして、OAS1は宿主—病原体相互作用や、サイトカインにより制御される転写プログラムへの影響という観点から広く研究されています。

OAS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OAS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OAS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OAS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOAS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OAS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOAS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOAS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOAS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOAS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。