Nurr1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400289-ACT

NR4A2 codifica o recetor nuclear órfão Nurr1, um fator de transcrição que regula programas génicos que controlam a diferenciação neuronal, a homeostase mitocondrial e a sinalização anti-inflamatória. O Nurr1 é um determinante-chave do desenvolvimento e da manutenção de neurónios dopaminérgicos, coordenando redes transcricionais envolvidas na síntese de dopamina, no transporte vesicular e em vias de resposta ao stress. Interage com a sinalização de recetores nucleares e com processos de regulação da cromatina para modular o destino celular e a sobrevivência em condições de stress inflamatório ou oxidativo. A desregulação da atividade de NR4A2/Nurr1 tem sido associada à neurodegeneração e a alterações da ativação imunitária, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de vias relacionadas com a doença de Parkinson e de fenótipos neuroinflamatórios.

Nurr1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NR4A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nurr1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NR4A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NR4A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nurr1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NR4A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nurr1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nurr1 em células tumorais com expressão de NR4A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.