NRAMP 1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421957-ACT

Slc11a1はNRAMP1をコードしており、NRAMP1はマクロファージやその他の骨髄系細胞において、鉄やマンガンを含む二価金属イオンのフラックスを調節するファゴソーム膜トランスポーターである。金属の利用可能性とファゴリソソーム内環境を形成することで、NRAMP1は抗菌エフェクター機能、酸化ストレスへの対処、ならびに炎症反応を協調させる下流の自然免疫シグナル伝達プログラムに影響を及ぼす。マウスモデルでは、Slc11a1の多様性（変異）が、マクロファージの活性化状態やサイトカインネットワークへの作用を介して、細胞内病原体に対する感受性の変化や免疫駆動性病態と関連することが示されている。これらの特性により、NRAMP1は、宿主—病原体相互作用、食細胞における金属恒常性、免疫代謝制御を研究するための有用な切り口となる。

NRAMP 1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Slc11a1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NRAMP 1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Slc11a1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSlc11a1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NRAMP 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSlc11a1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNRAMP 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSlc11a1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNRAMP 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。