NR3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406162

Übersicht

GRIN3B kodiert die NR3B‑Untereinheit der N‑Methyl‑D‑Aspartat(NMDA)-Rezeptoren, einer Klasse ionotroper Glutamatrezeptoren, die die erregende synaptische Transmission und Ca²⁺‑abhängige Signalwege im zentralen Nervensystem regulieren. Der Einbau von Untereinheiten der NR3‑Familie kann die Biophysik des Rezeptors verändern, einschließlich Agonistenempfindlichkeit und Kanaleigenschaften, und dadurch synaptische Plastizität sowie aktivitätsabhängige Genregulation feinabstimmen. Die durch GRIN3B vermittelte Modulation glutamaterger Signalübertragung überschneidet sich mit Signalwegen, die die neuronale Entwicklung, die Verfeinerung neuronaler Schaltkreise und die Calciumhomöostase steuern. Eine fehlregulierte NMDA‑Rezeptorfunktion ist relevant für Untersuchungen neuroentwicklungsbezogener und neuropsychiatrischer Phänotypen, excitotoxischer Stressantworten und Mechanismen veränderter synaptischer Konnektivität.

Das NR3B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GRIN3B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GRIN3B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GRIN3B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NR3B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GRIN3B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NR3B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GRIN3B-Exone abzielen, die für die NR3B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GRIN3B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NR3B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NR3B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GRIN3B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NR3B HDR-Plasmid (h) und NR3B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GRIN3B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GRIN3B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.