Particules Lentivirales d'Activation (h) NQO1: sc-400326-LAC

NQO1 (NAD(P)H quinone déshydrogénase 1) est une flavoprotéine cytosolique qui catalyse la réduction des quinones en hydroquinones par un transfert de deux électrons, limitant ainsi le cycle rédox et la production d’espèces réactives de l’oxygène. En tant qu’enzyme de détoxification canonique régulée par l’axe NRF2/KEAP1, NQO1 contribue à l’homéostasie rédox cellulaire et s’inscrit à l’interface du métabolisme des xénobiotiques, des réponses au stress oxydant et de la protéostasie via la stabilisation de certaines protéines. Des modifications de l’expression et de l’activité de NQO1 ont été associées à des variations de susceptibilité aux dommages oxydatifs ainsi qu’à une biologie tumorale dépendante du contexte, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la carcinogenèse et l’adaptation au stress. NQO1 est également fréquemment utilisée comme marqueur de l’activation de la voie de signalisation des éléments de réponse antioxydante (ARE) et des programmes transcriptionnels induits par des électrophiles.

Les particules d'activation lentivirales NQO1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NQO1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NQO1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NQO1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NQO1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NQO1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.