Plasmide CRISPR/Cas9 KO NPY4-R (h): sc-406230

Présentation

NPY4R code le récepteur Y4 du neuropeptide Y (NPY4-R), un RCPG couplé à Gi/o, activé préférentiellement par le polypeptide pancréatique, qui module la signalisation de l’AMPc, l’activité des canaux ioniques et les voies MAPK/ERK en aval. NPY4-R est exprimé dans des tissus périphériques et dans certaines régions sélectionnées du SNC, reliant les signaux neuroendocriniens à la régulation du comportement alimentaire, de l’équilibre énergétique, de la motilité gastro-intestinale et du contrôle autonome. L’activation du récepteur influence l’excitabilité cellulaire et les programmes sécrétoires via l’inhibition de l’adénylate cyclase et une signalisation médiée par les sous-unités βγ. Des altérations de la signalisation NPY4R ont été étudiées dans le contexte de la physiologie métabolique, de traits liés à l’obésité et de la régulation fonctionnelle gastro-intestinale, offrant un point d’entrée mécanistique pour l’exploration des circuits homéostatiques pilotés par les neuropeptides.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NPY4-R (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NPY4R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NPY4R, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NPY4R à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NPY4-R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NPY4R pour l'étude de la signalisation de NPY4-R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NPY4R essentiels à la fonction de NPY4-R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NPY4R pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NPY4-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NPY4-R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NPY4R. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NPY4-R plasmide HDR (h) et le NPY4-R (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NPY4R pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NPY4R définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.