Plasmide CRISPR/Cas9 KO NPDC-1 (m): sc-421942

Présentation

Npdc1 code la NPDC‑1, une protéine associée à la différenciation neuronale et gliale, impliquée dans le contrôle de la progression du cycle cellulaire et des programmes de maturation au sein du système nerveux. La NPDC‑1 a été reliée à la régulation des transitions entre prolifération et différenciation, avec des interactions décrites qui modulent les sorties transcriptionnelles et les voies de contrôle de la croissance dans les lignées neurales. Dans des modèles murins et des systèmes de cellules neurales, la modification de l’activité de la NPDC‑1 est utilisée pour étudier les mécanismes de croissance des neurites, de plasticité neuronale et de spécification de lignée. La dérégulation de ces processus est pertinente pour les anomalies du neurodéveloppement et pour des états cellulaires associés à une prolifération aberrante dans le tissu nerveux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NPDC-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Npdc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Npdc1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Npdc1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NPDC-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Npdc1 pour l'étude de la signalisation de NPDC-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Npdc1 essentiels à la fonction de NPDC-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Npdc1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NPDC-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NPDC-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Npdc1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NPDC-1 plasmide HDR (m) et le NPDC-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Npdc1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Npdc1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.