NPC1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403252-NIC

NPC1は、後期エンドソーム／リソソーム膜に局在する輸送体であるニーマン・ピック病C1型タンパク質をコードし、細胞内コレステロールおよび糖脂質の輸送を調整します。NPC2と協調し、リソソームから他の膜区画へのステロール排出を制御することで、NPC1は脂質恒常性、膜組成、ならびにエンドソーム－リソソーム動態やオートファジーに関連する下流シグナル伝達を支えます。NPC1機能の破綻はリソソーム内の脂質蓄積と細胞ストレス表現型を引き起こし、その変異はニーマン・ピック病C型に関連するほか、より広く神経変性および代謝に関する研究でも注目されています。そのためNPC1は、リソソーム機能、オルガネラ間コンタクトサイト、コレステロール依存的シグナル伝達を制御する経路の研究で広く用いられています。

NPC1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NPC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NPC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NPC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NPC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。