Plasmide Double Nickase (h) NPC1: sc-403252-NIC

NPC1 code la protéine de la maladie de Niemann-Pick de type C1, un transporteur membranaire des endosomes tardifs/lysosomes qui coordonne le trafic intracellulaire du cholestérol et des glycolipides. En s’associant à NPC2 et en régulant la sortie des stérols des lysosomes vers d’autres membranes, NPC1 contribue à l’homéostasie lipidique, à la composition membranaire et à la signalisation en aval liée à la dynamique endosome–lysosome et à l’autophagie. Une altération de la fonction de NPC1 entraîne une accumulation lysosomale de lipides et des phénotypes de stress cellulaire, et des variants sont associés à la maladie de Niemann-Pick de type C ainsi qu’à des travaux plus larges sur la neurodégénérescence et le métabolisme. NPC1 est donc largement étudiée dans les voies qui gouvernent la fonction lysosomale, les sites de contact entre organites et la signalisation dépendante du cholestérol.

NPC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NPC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NPC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NPC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NPC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.