Plásmido CRISPR de Activación (m) NPAS4: sc-432569-ACT

El gen Npas4 de ratón codifica la proteína neuronal con dominio PAS 4 (NPAS4), un factor de transcripción bHLH-PAS dependiente de la actividad que conecta la entrada de calcio con programas génicos que controlan el desarrollo de sinapsis inhibitorias y el equilibrio excitación–inhibición. NPAS4 regula redes transcripcionales implicadas en la plasticidad sináptica, el refinamiento de circuitos y la remodelación sensible a estímulos, integrando señales de la despolarización neuronal y de vías posteriores asociadas a CREB. En entornos de investigación, la alteración de la expresión de NPAS4 se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y del neurodesarrollo, incluidas adaptaciones conductuales relacionadas con el estrés, susceptibilidad a convulsiones y disfunción cognitiva, lo que subraya su relevancia para los mecanismos de estabilidad de las redes neuronales. Como regulador de respuesta temprana rápida, NPAS4 se utiliza ampliamente para explorar cómo la actividad neuronal reconfigura estados transcripcionales y la conectividad sináptica.

NPAS4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Npas4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NPAS4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Npas4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Npas4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NPAS4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Npas4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NPAS4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NPAS4 en células tumorales con expresión de Npas4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.