Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
NP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421951
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- NP1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico NP1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NP1 Anticuerpo (B-8): sc-374199
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
NP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421951 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La pentraxina neuronal 1 (Nptx1; NP1) es una pentraxina neuronal secretada, enriquecida en sinapsis excitatorias, donde contribuye a la remodelación sináptica dependiente de la actividad y a la organización de la señalización glutamatérgica. NP1 participa en redes de proteínas extracelulares que influyen en el agrupamiento de receptores AMPA y en la estabilización sináptica, vinculando la actividad neuronal con el refinamiento de circuitos y la plasticidad. En sistemas murinos, la regulación de Nptx1 se ha asociado con procesos que incluyen la sinaptogénesis, el crecimiento de neuritas y cascadas de señalización dependientes de calcio que moldean la conectividad dependiente de la experiencia. La alteración de la expresión de NP1 y de la dinámica de la vía de las pentraxinas neuronales se ha implicado en fenotipos relacionados con la neurodegeneración y las convulsiones, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la disfunción sináptica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO NP1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nptx1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nptx1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nptx1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NP1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nptx1 para la investigación de la señalización de NP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Nptx1 críticos para la función de NP1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nptx1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido NP1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NP1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nptx1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NP1 (m) y el plásmido HDR NP1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nptx1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nptx1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.