Nop56 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404035-ACT

ヒトのNOP56は、リボソーム生合成の過程でpre-rRNAの2′-O-メチル化およびプロセシングを誘導するbox C/D小核小体RNAタンパク質複合体（snoRNP）の、核小体における必須コア構成要素であるNop56をコードする。Nop56はフィブリラリンや他のsnoRNP因子との相互作用を介して、18Sおよび28S rRNAの成熟とリボソームサブユニットの適切な組み立てを支え、全体的な翻訳能および核小体恒常性と結び付いている。リボソーム生合成の破綻や核小体ストレス経路の活性化は、細胞周期制御やプロテオスタシスを変化させうるため、NOP56の機能は増殖制御やストレス適応の研究において重要である。さらに、NOP56は脊髄小脳失調症36型（SCA36）におけるリピート伸長関連の神経変性機構にも関与するとされ、RNA代謝や核小体機能障害に関する機序研究を促している。

Nop56 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOP56の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nop56 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOP56 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOP56転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nop56の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOP56遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNop56依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOP56発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNop56経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。