Nociceptin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421945

Übersicht

Pnoc kodiert Nociceptin/Orphanin FQ, ein endogenes neuropeptiderges Ligandenmolekül für den Opioidrezeptor-ähnlichen 1‑Rezeptor (OPRL1/NOP), das die neuronale Erregbarkeit und die synaptische Transmission moduliert. Die Nociceptin-Signalübertragung aktiviert Gi/o‑gekoppelte Signalwege, die die Adenylylcyclase-Aktivität verringern, cAMP/PKA‑abhängige Effekte regulieren und die Ionenkanal-Leitfähigkeit sowie die Neurotransmitterfreisetzung beeinflussen. Im zentralen Nervensystem und in peripheren Geweben trägt diese Achse zur Regulation von Nozizeption, Stressreaktivität, Belohnungsschaltkreisen und der neuroendokrinen Funktion bei. Eine Dysregulation der PNOC–NOP‑Signalgebung wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Schmerzverarbeitung, angst- und depressionsähnliche Verhaltensweisen, substanzkonsumbezogene Neuroadaptationen sowie die Modulation von Entzündungsprozessen relevant sind.

Das Nociceptin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pnoc-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pnoc-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pnoc nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Nociceptin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pnoc-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Nociceptin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pnoc-Exone abzielen, die für die Nociceptin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pnoc-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Nociceptin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Nociceptin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pnoc-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Nociceptin HDR-Plasmid (m) und Nociceptin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pnoc-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pnoc-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.