Plasmide CRISPR/Cas9 KO NMNAT-3 (h): sc-403839

Présentation

NMNAT3 code pour la nicotinamide mononucléotide adénylyltransférase 3 (NMNAT-3), une enzyme mitochondriale qui catalyse la dernière étape de la biosynthèse du NAD+ à partir du nicotinamide mononucléotide, en maintenant les réserves de NAD+ au sein de l’organite, indispensables au métabolisme oxydatif. En contrôlant les réactions d’oxydoréduction dépendantes du NAD+ et en soutenant la signalisation liée aux sirtuines et aux PARP, NMNAT-3 influence l’homéostasie mitochondriale, les réponses cellulaires au stress et l’équilibre énergétique. Une activité altérée de NMNAT3 a été associée à une dérégulation du métabolisme du NAD+ et à un dysfonctionnement mitochondrial, des processus impliqués dans la neurodégénérescence, les troubles cardiométaboliques et l’adaptation métabolique des cellules tumorales. En tant que nœud mitochondrial du NAD+, NMNAT-3 est pertinent pour les études de bioénergétique, de maintenance mitochondriale et de voies de signalisation couplées au NAD+.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NMNAT-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NMNAT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NMNAT3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NMNAT3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NMNAT-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NMNAT3 pour l'étude de la signalisation de NMNAT-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NMNAT3 essentiels à la fonction de NMNAT-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NMNAT3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NMNAT-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NMNAT-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NMNAT3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NMNAT-3 plasmide HDR (h) et le NMNAT-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NMNAT3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NMNAT3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.