NMD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406373

Übersicht

NMD3 kodiert einen essenziellen Faktor der Ribosomenbiogenese, der als Adapter für den Export von prä-60S-ribosomalen Untereinheiten aus dem Zellkern ins Zytoplasma fungiert. Durch die Koordination mit dem CRM1/XPO1-Exportweg und Umbauprozessen während der späten 60S-Reifung trägt NMD3 dazu bei, die produktive Assemblierung translational kompetenter Ribosomen sowie die Aufrechterhaltung der Proteostase sicherzustellen. Eine Störung des NMD3-abhängigen Ribosomenexports kann nukleoläre Stressantworten auslösen und über nachgelagerte Effekte auf die globale Translation den Zellzyklusverlauf verändern. Da die Ribosomenbiogenese eng mit der Wachstumskontrolle verknüpft ist, ist eine fehlregulierte Steuerung dieses Prozesses für Studien zu proliferations- und stressassoziierten Krankheitsmechanismen relevant, einschließlich Ribosomopathien und krebsassoziierter translationaler Umprogrammierung.

Das NMD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NMD3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NMD3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NMD3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NMD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NMD3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NMD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NMD3-Exone abzielen, die für die NMD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NMD3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NMD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom NMD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NMD3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NMD3 HDR-Plasmid (h) und NMD3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NMD3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NMD3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.