NKp44 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407295-ACT

ヒトNCR2はNKp44をコードしており、NKp44は活性化NK細胞および一部の自然リンパ球（ILC）に発現する活性化型のナチュラルキラー（NK）細胞受容体で、細胞表面における免疫監視シグナルの統合に寄与します。NKp44は、ストレス下・感染・形質転換した細胞上の多様なリガンドと結合し、アダプター依存性のシグナル伝達を介して活性化を伝え、細胞傷害性顆粒の放出やサイトカイン産生に関与します。この受容体は、自然免疫による認識、免疫受容体チロシンベースのシグナル伝達、ならびに炎症応答の制御に関わる経路に参加します。NCR2/NKp44の活性や発現パターンの破綻は、ウイルス感染、腫瘍免疫、慢性炎症性疾患の機序などの文脈において、NK細胞機能の変化と関連していることが示されています。

NKp44 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NCR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NKp44 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NCR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNCR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NKp44の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNCR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNKp44依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNCR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNKp44経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。