Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 (m): sc-418958

Présentation

Chrnb2 code la sous-unité β2 des récepteurs nicotiniques neuronaux de l’acétylcholine (nAChR), un canal cationique pentamérique activé par un ligand qui assure une neurotransmission cholinergique rapide. Les nAChR contenant β2 régulent la dépolarisation membranaire et l’influx de Ca²⁺, modulant la plasticité synaptique, la libération de neurotransmetteurs et l’excitabilité des circuits dans des voies liées à l’attention, à la récompense et à l’éveil. Par ces événements de signalisation ionotrope, CHRNB2 influence l’expression génique dépendante de l’activité et des processus en aval associés à MAPK/CREB. Des perturbations génétiques et fonctionnelles des nAChR contenant β2 ont été associées à des phénotypes neurocomportementaux et à des mécanismes liés aux crises, faisant de Chrnb2 une cible pertinente pour modéliser les contributions cholinergiques à la biologie des maladies neurologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chrnb2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chrnb2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chrnb2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chrnb2 pour l'étude de la signalisation de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chrnb2 essentiels à la fonction de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chrnb2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chrnb2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 plasmide HDR (m) et le Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chrnb2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chrnb2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.