Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nibrin: sc-401723-ACT

Le gène humain **NBN** code la nibrine, un composant essentiel du complexe **MRN** (MRE11–RAD50–NBN), qui détecte les cassures double brin de l’ADN et coordonne la signalisation des dommages. La nibrine favorise l’activation d’ATM, le pontage des extrémités d’ADN et le choix de voie entre la recombinaison homologue et la jonction d’extrémités non homologues, contribuant ainsi à la stabilité du génome et au bon contrôle du point de contrôle de la phase S. L’altération de la fonction de **NBN** est associée à une réparation déficiente des cassures double brin, à l’instabilité chromosomique et à une hypersensibilité au stress génotoxique, avec des implications pour le syndrome de cassures de Nijmegen et la prédisposition aux cancers. Ces propriétés font de **NBN** une cible largement utilisée pour étudier les voies de réponse aux dommages de l’ADN, le stress réplicatif et les mécanismes de maintien du génome dans les cellules humaines.

Nibrin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NBN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nibrin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NBN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NBN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nibrin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NBN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nibrin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nibrin dans les cellules tumorales présentant une expression de NBN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.