NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421878

概要

Nfkbia は NF-κB inhibitor alpha（IκBα）をコードしており、これはカノニカル NF-κB シグナル伝達の主要な負の制御因子です。IκBα は RelA/p50 複合体に結合し、平常時にはそれらを細胞質内に保持します。炎症性サイトカイン、Toll 様受容体（TLR）リガンド、または抗原受容体シグナルによる刺激を受けると、IκBα は IKK 複合体によってリン酸化され分解され、これにより NF-κB が核内へ移行して、免疫応答、ストレス応答、生存に関わる遺伝子の転写が誘導されます。このフィードバック回路は、自然免疫・獲得免疫の活性化、サイトカイン産生、細胞運命の決定を形作っており、炎症駆動性の組織リモデリングやがん化シグナルを研究する際の機序的な入口として広く利用されています。マウス系では、NFKBIA の攪乱が、免疫調節異常や腫瘍微小環境シグナルのモデルにおいて、MAPK、インターフェロン、アポトーシス経路とのクロストークを解明するために一般的に用いられます。

NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNfkbia遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nfkbia内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nfkbiaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NFKBIA/IkB alphaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NFKBIA/IkB alphaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nfkbia欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NFKBIA/IkB alphaの機能に不可欠なNfkbiaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nfkbiaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNFKBIA/IkB alpha CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nfkbia遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NFKBIA/IkB alpha HDRプラスミド（m）および NFKBIA/IkB alpha HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNfkbiaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNfkbia標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。