Neurofibromin 2/NF2/Merlin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400504-NIC

NF2は、神経線維腫症2型タンパク質（Merlin）をコードしており、Merlinは細胞膜と細胞骨格をつなぐアダプターとして、細胞間接着部位やアクチン皮質からのシグナルを統合し、増殖を抑制して上皮構造を維持します。Merlinは、接触阻止を制御し、Hippo‐YAP/TAZ経路、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）シグナル伝達、ならびに細胞移動や力学的シグナル伝達に影響する細胞骨格ダイナミクスなどの経路を調節することで腫瘍抑制因子として機能します。NF2の欠失または不活化は、これらの増殖制御ネットワークを破綻させ、異常な細胞周期への進入や、接着依存的シグナル伝達の変化を促進します。NF2機能不全は神経線維腫症2型や、Merlin欠損腫瘍である神経鞘腫や髄膜腫と強く関連しており、ヒト細胞における増殖制御とメカノトランスダクション（機械刺激の情報伝達）を研究する上で重要な結節点となっています。

Neurofibromin 2/NF2/Merlin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NF2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NF2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NF2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NF2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。