neogenin Plasmide Double Nickase (h): sc-401204-NIC

Il gene umano NEO1 codifica la neogenina, un recettore di guida transmembrana della superfamiglia delle immunoglobuline che lega le netrine e le molecole guida repulsive (RGM) per coordinare la navigazione degli assoni, la migrazione neuronale e la morfogenesi dei tessuti. La segnalazione della neogenina interagisce con il rimodellamento del citoscheletro e con le vie di adesione, e può modulare programmi di sviluppo attraverso cross-talk tra recettori e una regolazione dipendente dal contesto della sopravvivenza e della differenziazione cellulare. Oltre al sistema nervoso, NEO1 partecipa all’organizzazione epiteliale e allo sviluppo vascolare e scheletrico, collegando gradienti di segnali di guida al movimento polarizzato e alle interazioni cellula–cellula. Alterazioni dell’espressione di NEO1 o squilibri della sua via sono stati associati a fenotipi di neuro-sviluppo e alla biologia tumorale, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della segnalazione di guida e del controllo dello stato cellulare.

neogenin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NEO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NEO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NEO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NEO1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.